高壓滅菌器可殺滅包括芽胞在內的所有微生物。在103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽壓下，溫度達到121.3℃，維持15～20分鐘。適用于普通培養基、生理鹽水、手術器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的滅菌。
高壓蒸汽滅菌的時間計算，應從滅菌器柜室內達到要求溫度時算起，**滅菌完成為止。
總時間包括：熱力穿透時間，即從消毒柜內達到滅菌溫度**消毒物品中心部位亦達到滅菌溫度所需時間。時間的長短取決于消毒物品的性質、包裝的大小,放置位置和高壓鍋內空氣排空程度和滅菌器的種類。消毒維持時間，即殺滅微生物所需的時間，一般用殺滅脂肪嗜熱桿菌芽胞所需時間來表示。
在115℃時需30分鐘，121℃時需12分鐘，132℃時需2分鐘。安全時間，一般為維持時間的一半，其長短視消毒物品而定。對易導熱的金屬器材的滅菌，不需要安全時間。
一般下排氣式高壓滅菌器所需時間為：115℃30分鐘，121℃15分鐘，126℃10分鐘。115℃常用于制藥工業上的滅菌。在微生物實驗室內，有些含糖培養基亦用115℃30分鐘滅菌，因為在更高溫度下糖會分解。121℃～126℃常用于醫療衛生和防疫工作中的滅菌。
以上所述知識滅菌時間的概數，1次滅菌中具體使用多少時間，需要根據物品的種類、包裝的大小、安放情況和滅菌器的性能來確定。下表提供的數據可供實際工作中參考。
物品種類 | 滅菌時間(分鐘) | |
121℃ | 126℃ | |
手術用品* | | |
器械包 | 15 | 10 |
橡膠手套 | 25 | 20 |
敷料包 | 30 | 20 |
敷料鼓 | 45 | 30 |
封閉的瓶裝液體** | | |
500ml | 20 | 15 |
1,000ml | 25 | 20 |
2,000ml | 40 | 35 |
5,000ml | 50 | 45 |
無蓋鐵桶的微生物實驗室廢物 | | |
大小18×28×36cm3 | 40 | 35 |
直徑28cm、高25cm | 60 | 55 |
大小36×22×22cm3 | >100 | >100 |
* 包裝體積 < 30×30×30cm3
** 對于粘性液體，如瓊脂培養基等，應延長時間5～10分鐘
