
目的:建立一套適用的培養操作規程,進行無感染條件(tiáo jiàn)下體外細胞(cell)擴大培養。
主體內(in vivo)容:
操作步驟(procedure):
1、紫外燈照射超凈工作(gōng zuò)臺30分鐘(根據實際情況(Condition),可適當增加或縮短照射時間,但時間長一點總比時間短一點安全(security)。)
2、將培養液、PB
S、放在37℃水浴中溫育(每次用多少,溫育多少,這樣既可節約(jié yuē)溫育的時間,又可延長藥品的使用期限。生物安全柜可保護工作人員和環境而不保護樣品。氣流原理和實驗室通風櫥一樣,不同之處在于排氣口安裝有HEPA過濾器。所有類型的生物安全柜都在排氣和進氣口使用HEPA過濾器。)
3、超凈工作(gōng zuò)臺照射30分鐘后,關閉紫外,打開照明(illumination),打開排風10分鐘后再次進入細胞(cell)培養室。壓力蒸汽滅菌器是應用**早、效果**可靠、使用**廣泛的一種物理滅菌方法。(注意(attention):要打開排風10分鐘后再進行操作控制,這樣才能保證循環(continue)的風是無菌的。同時還會避免有菌的風直接吹到人的呼吸道中,對人體也有一定的保護作用)
4、戴上口罩及手套(gloves)(有條件的**好戴上帽子,不過也沒關系,我們實驗室就沒戴)
5、用70-75%的酒精擦試實驗(experiment)物品(article),然后拿入超凈工作(gōng zuò)臺中。
6、操作控制時注意(attention)以下幾點:盡量在酒精(術語稱乙醇)燈火焰附近操作,但如果管子(tube)里有細胞就要離火焰有一定距離了,否則細胞要燙死了;不要重復使用(use)移液管(即吸一次后,就換新的管);不要在敞開的容器上方操作;手上的酒精不要擦太多,否則靠近酒精燈時容易把手燒到(我想非常多人都有過被燒的經歷吧);
其實操作控制是很簡單的,但一定要仔細。生物安全柜是為操作原代培養物、菌毒株以及診斷性標本等具有感染性的實驗材料時,用來保護操作者本人、實驗室環境以及實驗材料,使其避免暴露于上述操作過程中可能產生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的。尤其是第2步許多人都不注意(attention),細胞(cell)平時放在37℃培養,如果加入的PBS或溫度太低,會對細胞有操傷的,雖然這種損傷短期內察覺不到,但時間長了,就會顯現出來。