一、輸液系統(tǒng)故障(高頻,影響流動(dòng)相輸送)
1. 壓力異常(壓力過高 / 過低 / 波動(dòng))
故障現(xiàn)象 | 可能原因 | 排查與解決步驟 |
壓力突然升高(超過正常范圍 50% 以上) | 1. 色譜柱堵塞(流動(dòng)相污染、樣品殘留);2. 管路堵塞(過濾白頭堵塞、單向閥污染);3. 流動(dòng)相粘度大(如高比例乙腈 / 緩沖鹽低溫下) | 1. 斷開色譜柱,用兩通替代,若壓力恢復(fù)正常→柱子堵塞,需用合適溶劑反向沖洗(如反相柱用甲醇 - 水梯度沖洗);2. 若壓力仍高→檢查管路:拆過濾白頭(入口單向閥處),用甲醇超聲清洗,或更換新白頭;3. 冬季可將流動(dòng)相恒溫至 25℃,降低粘度。 |
壓力過低(接近 0 或無壓力) | 1. 流動(dòng)相不足(溶劑瓶空、管路進(jìn)氣);2. 單向閥泄漏(密封圈老化、有氣泡);3. 泵頭密封墊磨損 | 1. 檢查溶劑瓶液位,若管路進(jìn)氣→打開排液閥,用 “Purge" 功能沖洗泵頭,排出氣泡;2. 拆下單向閥,用甲醇超聲 10 分鐘(避免用超聲清洗密封圈),晾干后重裝;3. 若仍泄漏→更換泵頭密封墊(安捷倫配件號(hào)如 G1311-68701)。 |
壓力波動(dòng)(忽高忽低) | 1. 流動(dòng)相中有氣泡(混合溶劑脫氣不充分);2. 單向閥污染;3. 比例閥故障(梯度洗脫時(shí)) | 1. 開啟在線脫氣機(jī)(若有),或手動(dòng)搖晃流動(dòng)相瓶排氣后超聲脫氣;2. 按 “壓力過低" 步驟清洗單向閥;3. 梯度模式下,切換至等度模式測試,若波動(dòng)消失→比例閥需校準(zhǔn)(用安捷倫 ChemStation 軟件執(zhí)行 “比例閥校準(zhǔn)")。 |
2. 流動(dòng)相輸送異常(漏液 / 梯度偏差)
漏液位置與解決:
溶劑瓶接口漏液:管路接頭松動(dòng)→重新擰緊;接頭老化→更換 PEEK 接頭(避免過緊導(dǎo)致開裂)。
泵頭漏液:密封墊磨損→更換密封墊;排液閥未關(guān)緊→順時(shí)針擰緊排液閥旋鈕(勿過度用力)。
柱溫箱內(nèi)漏液:色譜柱接頭松動(dòng)→用扳手輕輕擰緊(反相柱常用 10-15N?m 扭矩);柱子兩端篩板破損→更換色譜柱篩板。
梯度偏差(保留時(shí)間漂移):
原因:比例閥污染、流動(dòng)相混合不均;
解決:用異丙醇沖洗比例閥(執(zhí)行 “比例閥沖洗" 程序),混合溶劑需提前手動(dòng)搖勻后再倒入溶劑瓶。
二、進(jìn)樣系統(tǒng)故障(影響進(jìn)樣準(zhǔn)確性)
1. 進(jìn)樣針相關(guān)問題
故障現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決步驟 |
進(jìn)樣針堵塞(無法吸液 / 推液) | 1. 樣品中有顆粒物(未過濾);2. 樣品殘留(如蛋白、強(qiáng)極性物質(zhì)) | 1. 用 50% 甲醇 - 水超聲清洗進(jìn)樣針(超聲時(shí)間≤5 分鐘,避免損壞針芯);2. 若堵塞嚴(yán)重→用細(xì)鋼絲通針(安捷倫專用通針工具,勿用普通鋼絲劃傷針內(nèi)壁);3. 后續(xù)樣品需經(jīng) 0.22μm 濾膜過濾。 |
進(jìn)樣針漏液(吸液后滴液) | 1. 針芯磨損;2. 進(jìn)樣針與進(jìn)樣閥接口不匹配(如用錯(cuò)規(guī)格針) | 1. 更換進(jìn)樣針(安捷倫 1260 進(jìn)樣針常用型號(hào)如 G1329-20530);2. 確認(rèn)進(jìn)樣針規(guī)格:手動(dòng)進(jìn)樣閥用 25μL/100μL 針,自動(dòng)進(jìn)樣器需匹配對(duì)應(yīng)型號(hào)(如 1290 自動(dòng)進(jìn)樣器用 G4226-68700)。 |
2. 自動(dòng)進(jìn)樣器故障
進(jìn)樣后無峰 / 峰面積變小:
原因:進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子污染、進(jìn)樣量設(shè)置錯(cuò)誤;
解決:拆開進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子,用甲醇超聲清洗(轉(zhuǎn)子材質(zhì)為 PEEK,避免接觸強(qiáng)酸堿);檢查軟件中 “進(jìn)樣量" 參數(shù)是否與方法一致(如誤設(shè)為 1μL 而非 10μL)。
進(jìn)樣器卡針(機(jī)械臂不動(dòng)):
原因:進(jìn)樣針未放回正確位置、機(jī)械臂軌道有異物;
解決:手動(dòng)將進(jìn)樣針放回針座,清除軌道上的灰塵 / 廢液,重啟自動(dòng)進(jìn)樣器(關(guān)閉電源后 30 秒再開機(jī))。
三、檢測系統(tǒng)故障(影響信號(hào)采集)
1. 紫外檢測器(UV/VWD)常見問題
故障現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決步驟 |
基線漂移(緩慢上升 / 下降) | 1. 流動(dòng)相未平衡(新?lián)Q流動(dòng)相后);2. 檢測器燈能量不足(壽命到期);3. 流通池污染 | 1. 讓流動(dòng)相持續(xù)沖洗系統(tǒng)(通常需 30-60 分鐘,基線漂移≤0.01mAU/h 為正常);2. 查看燈能量:在 ChemStation 軟件中 “檢測器→燈能量",若能量低于初始值 50%→更換氘燈(安捷倫氘燈型號(hào)如 G1314-60100);3. 清洗流通池:用 10% 硝酸 - 水、甲醇依次沖洗, each 溶劑沖洗 10 分鐘。 |
基線噪音大(雜峰多) | 1. 流動(dòng)相污染(溶劑純度不夠,如用 AR 級(jí)替代 HPLC 級(jí));2. 流通池有氣泡;3. 電源干擾(如靠近離心機(jī)) | 1. 更換 HPLC 級(jí)溶劑,新流動(dòng)相需超聲脫氣 20 分鐘;2. 打開檢測器排液閥,用注射器從流通池出口抽氣,或執(zhí)行 “流通池排氣" 程序;3. 將儀器遠(yuǎn)離強(qiáng)電磁干擾設(shè)備,檢查電源接地是否良好。 |
無信號(hào)輸出(基線為 0) | 1. 檢測器未開啟(燈未點(diǎn)亮);2. 信號(hào)線纜松動(dòng)(檢測器與工作站連接);3. 流通池堵塞(無流動(dòng)相通過) | 1. 在軟件中開啟檢測器燈(“檢測器→燈控制→開啟");2. 檢查檢測器背面信號(hào)線纜,重新插拔并擰緊;3. 斷開流通池入口管路,用注射器推液,若推不動(dòng)→清洗流通池(同 “基線漂移" 步驟)。 |
2. 示差折光檢測器(RID)故障
基線不穩(wěn)定(波動(dòng)大):
原因:柱溫 / 檢測池溫波動(dòng)(溫差>0.1℃)、流動(dòng)相折射率變化;
解決:確保柱溫箱與 RID 檢測池溫度一致(如均設(shè)為 30℃),流動(dòng)相需一次性配制足量,避免分次配制導(dǎo)致折射率差異。
四、柱系統(tǒng)故障(影響分離效果)
1. 色譜峰異常(峰形差 / 保留時(shí)間漂移)
故障現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決步驟 |
峰拖尾(拖尾因子>1.5) | 1. 色譜柱柱頭污染(樣品殘留);2. 流動(dòng)相 pH 不合適(如堿性樣品用酸性流動(dòng)相);3. 柱子老化(柱效下降) | 1. 反向沖洗色譜柱(如反相柱用甲醇 - 乙腈 - 甲醇梯度沖洗,流速 1mL/min,沖洗 30 柱體積);2. 調(diào)整流動(dòng)相 pH:堿性樣品添加 0.1% 三乙胺,酸性樣品添加 0.1% 磷酸;3. 若柱效下降>30%→更換新色譜柱。 |
峰分裂(單峰變雙峰) | 1. 進(jìn)樣量過大(超過柱子容量);2. 柱子柱頭塌陷(填料流失);3. 樣品溶劑與流動(dòng)相不兼容(如用純甲醇溶解樣品,流動(dòng)相為水 - 乙腈) | 1. 減少進(jìn)樣量(如從 20μL 減至 10μL);2. 檢查柱子柱頭:若填料凹陷→更換柱頭篩板或報(bào)廢柱子;3. 更換樣品溶劑,使其與流動(dòng)相比例一致(如用 50% 水 - 50% 乙腈溶解樣品)。 |
保留時(shí)間漂移(每次進(jìn)樣相差>2%) | 1. 流動(dòng)相比例變化(溶劑揮發(fā),如甲醇易揮發(fā));2. 柱溫波動(dòng);3. 柱子平衡不充分 | 1. 密封溶劑瓶(用帶透氣膜的瓶蓋),每天更換新鮮流動(dòng)相;2. 檢查柱溫箱溫度是否穩(wěn)定(波動(dòng)≤0.5℃);3. 新柱子或長時(shí)間未用的柱子,需用流動(dòng)相沖洗 60 分鐘以上再進(jìn)樣。 |
2. 色譜柱堵塞(壓力高 + 峰面積變小)
解決:用 “低流速反向沖洗":反相柱用甲醇 - 水(90:10),流速 0.2mL/min,沖洗 12 小時(shí);正相柱用正己烷 - 異丙醇(90:10),避免用含水溶劑。
五、日常維護(hù)要點(diǎn)(減少故障概率)
流動(dòng)相管理:
僅用 HPLC 級(jí)溶劑,緩沖鹽(如磷酸二氫鉀)需用超純水配制,配制后 24 小時(shí)內(nèi)使用(避免微生物滋生)。
每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用 10% 甲醇 - 水沖洗系統(tǒng) 30 分鐘(反相柱),正相柱用正己烷沖洗,防止鹽結(jié)晶或樣品殘留。
部件定期更換:
泵頭密封墊:每 3000 小時(shí)更換一次;
氘燈:每 2000 小時(shí)或能量不足時(shí)更換;
過濾白頭:每 1000 小時(shí)或壓力升高時(shí)更換。
軟件維護(hù):
每周執(zhí)行一次 “系統(tǒng)性能測試"(如測試柱效、壓力穩(wěn)定性);
每月備份方法文件和數(shù)據(jù),避免軟件崩潰導(dǎo)致數(shù)據(jù)丟失。


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