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山東CO2培養(yǎng)箱HH.CP-TW二氧化碳箱160升何用二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存實(shí)驗(yàn)一  復(fù)蘇 傳代

（1） 準(zhǔn)備

   無菌超凈臺(tái)，酒精燈，75%酒精噴壺，二氧化碳培養(yǎng)箱，37℃水浴鍋，離心機(jī)；培養(yǎng)瓶，含10%胎牛血清的*培養(yǎng)基和基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及PBS磷酸緩沖液（提前放置超凈臺(tái)使平衡到室溫），無菌工作服（白大褂），口罩，手套，記號(hào)筆

（2） 步驟

   1.穿好無菌工作服，帶上口罩和手套，快速從液氮里取出凍存管，快速放進(jìn)37℃水浴鍋緩慢搖晃使細(xì)胞解凍，注意凍存管的封口膜不要破裂，防止污染。

   2.解凍后用紙擦干凍存管表面的水滴，酒精噴壺噴灑適量75%酒精消毒凍存管封口處。

   3.開超凈臺(tái)，點(diǎn)燃酒精燈燃燒片刻后（可提前準(zhǔn)備），凍存管放超凈臺(tái)，換新手套，小心打開凍存管，避免污染，無菌吸管將1ml細(xì)胞全部吸出至5ml無菌EP管，補(bǔ)加9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基稀釋，1000rpm，離心5min使細(xì)胞沉淀，棄上清。

   4.加入新鮮配制的含10%血清的培養(yǎng)基4ml，輕輕混勻，用吸管將細(xì)胞移至25T培養(yǎng)瓶。

   5.平躺放置培養(yǎng)瓶，8字形混勻后，置于37℃，5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

   6.培養(yǎng)24小時(shí)后，顯微鏡觀察細(xì)胞（貼壁細(xì)胞）貼壁后，小心更換培養(yǎng)基，根據(jù)不同細(xì)胞的生長狀態(tài)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶上標(biāo)記：操作者，時(shí)間，細(xì)胞類型。

   7.有的實(shí)驗(yàn)員的培養(yǎng)基會(huì)加入抗生素防止細(xì)胞污染，但是這對(duì)于掌握細(xì)胞培養(yǎng)是非常不利的，不加抗生素培養(yǎng)細(xì)胞更能提醒實(shí)驗(yàn)者無菌操作的意識(shí)。一旦細(xì)胞出現(xiàn)污染，易于發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)污染的細(xì)胞應(yīng)立刻煮沸丟棄，以免污染同實(shí)驗(yàn)室其他細(xì)胞。

山東CO2培養(yǎng)箱HH.CP-TW二氧化碳箱160升技術(shù)參數(shù):

二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境，培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度（37°C）、穩(wěn)定的CO2水平（5%）、恒定的酸堿度（pH值：7.2-7.4）、較高的相對(duì)飽和濕度（95%），來對(duì)細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。
1、氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱：
對(duì)于使用者來說氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱設(shè)計(jì)更簡單化。
它的加熱系統(tǒng)是通過箱體內(nèi)的加熱器直接對(duì)箱內(nèi)氣體進(jìn)行加熱的。
氣套式培養(yǎng)箱加熱速度快，有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門頻繁開關(guān)的培養(yǎng)
氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱在設(shè)計(jì)箱門頻繁開關(guān)導(dǎo)致溫度經(jīng)常性改變的情況下能夠迅速恢復(fù)箱體內(nèi)的溫度穩(wěn)定。
2、水套式二氧化碳培養(yǎng)箱：
水套式二氧化碳培養(yǎng)箱是通過一個(gè)獨(dú)立的熱水間隔間，包圍內(nèi)部的箱體來維持溫度恒定的。
由于水是絕熱物質(zhì)，當(dāng)出現(xiàn)斷電情況，水套式二氧化碳培養(yǎng)箱可更保持培養(yǎng)內(nèi)溫度準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
水套式需要對(duì)水箱進(jìn)行加水，清空和清洗，并需要經(jīng)常對(duì)水箱進(jìn)行監(jiān)控。
如果用戶需要快速進(jìn)行培養(yǎng)建議選擇氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱，如用戶實(shí)驗(yàn)環(huán)境有用電限制或出現(xiàn)斷電的情況建議選擇水套式二氧化碳培養(yǎng)箱。